Tin tổng hợp

Tiểu luận Vi sinh vật chỉ thị – Luận văn, đồ án, đề tài tốt nghiệp

Vi sinh vật là những sinh vật có kích cỡ rất nhỏ mà mắt thường không hề nhìn thấy được, nó chỉ hoàn toàn có thể quan sát được dưới kính hiển vi và nó hoàn toàn có thể phân bổ khắp nơi trong thiên nhiên và môi trường đất, nước, không khí và cả môi trường tự nhiên sinh vật, sản phẩm & hàng hóa, lương thực, thực phẩm. Trong số những vi sinh vật này có những vi sinh vật mà sự xuất hiện của chúng trong thiên nhiên và môi trường với một số lượng, nồng độ nhất định gây cho môi trường tự nhiên bị ô nhiễm về mặt vi sinh vật. Tuy nhiên tất cả chúng ta không hề khảo sát từng nhóm vi sinh vật xem thiên nhiên và môi trường có bị ô nhiễm về mặt vi sinh vật hay không vì việc này gặp rất nhiều khó khăn vất vả về mặt kinh tế tài chính cũng như để bảo vệ bảo đảm an toàn cho người thao tác vì nhiều vi sinh vật rất nguy hại so với sức khỏe thể chất con người. Vậy làm thế nào để kiểm tra môi trường tự nhiên có bị ô nhiễm về mặt vi sinh vật hay không ? Đó là nhờ vào những vi sinh vật chỉ thị. Vậy vi sinh vật chỉ thị là gì ? Nó có những đặc thù nào ? Bao gồm những nhóm nào nổi bật và cách xác lập nó thế nào ? Đó là những yếu tố rất đáng chăm sóc, vì thế tôi chọn chủ đề “ Vi sinh vật chỉ thị ” làm đề tài bài tiểu luận .

docx12 trang |

Chia sẻ: superlens

| Lượt xem: 13295

| Lượt tải : 21download

Bạn đang xem nội dung tài liệu Tiểu luận Vi sinh vật chỉ thị, để tải tài liệu về máy bạn click vào nút DOWNLOAD ở trên

ĐẶT VẤN ĐỀ Vi sinh vật là những sinh vật có kích cỡ rất nhỏ mà mắt thường không hề nhìn thấy được, nó chỉ hoàn toàn có thể quan sát được dưới kính hiển vi và nó hoàn toàn có thể phân bổ khắp nơi trong môi trường tự nhiên đất, nước, không khí và cả môi trường tự nhiên sinh vật, sản phẩm & hàng hóa, lương thực, thực phẩm. Trong số những vi sinh vật này có những vi sinh vật mà sự xuất hiện của chúng trong môi trường tự nhiên với một số lượng, nồng độ nhất định gây cho môi trường tự nhiên bị ô nhiễm về mặt vi sinh vật. Tuy nhiên tất cả chúng ta không hề khảo sát từng nhóm vi sinh vật xem môi trường tự nhiên có bị ô nhiễm về mặt vi sinh vật hay không vì việc này gặp rất nhiều khó khăn vất vả về mặt kinh tế tài chính cũng như để bảo vệ bảo đảm an toàn cho người thao tác vì nhiều vi sinh vật rất nguy khốn so với sức khỏe thể chất con người. Vậy làm thế nào để kiểm tra môi trường tự nhiên có bị ô nhiễm về mặt vi sinh vật hay không ? Đó là nhờ vào những vi sinh vật chỉ thị. Vậy vi sinh vật chỉ thị là gì ? Nó có những đặc thù nào ? Bao gồm những nhóm nào nổi bật và cách xác lập nó thế nào ? Đó là những yếu tố rất đáng chăm sóc, vì thế tôi chọn chủ đề “ Vi sinh vật chỉ thị ” làm đề tài bài tiểu luận. NỘI DUNG Khái niệm vi sinh vật chỉ thị Vi sinh vật chỉ thị là những đối tượng người dùng vi sinh vật có nhu yếu nhất định về điều kiện kèm theo sinh thái xanh tương quan đến nhu yếu dinh dưỡng, hàm lượng oxy, cũng như năng lực chống chịu một hàm lượng nhất định những yếu tố ô nhiễm trong môi trường tự nhiên sống và do đó sự hiện hữu của chúng biểu lộ một thực trạng về điều kiện kèm theo sinh thái xanh môi trường tự nhiên sống nằm trong số lượng giới hạn nhu yếu và năng lực chống chịu của đối tượng người dùng vi sinh vật đó. Đặc điểm của vi sinh vật chỉ thị Đặc điểm của vi sinh vật chỉ thị là nhóm liên tục xuất hiện trong phân người, động vật hoang dã máu nóng, nước thải, thực phẩm kém chất lượng, , không hiện hữu ở mẫu sạch. Vi sinh vật chỉ thị thường có số lượng lớn hơn trong mẫu ô nhiễm lớn hơn những vi sinh vật gây bệnh khác, khi ở môi trường tự nhiên ngoài phải không sinh sản tăng số lượng. Đặc biệt là chúng phải dễ phát hiện và năng lực đề kháng phải giống với vi sinh vật gây bệnh. Các nhóm vi sinh vật chỉ thị Vi sinh vật chỉ thị gồm có những nhóm sau : Nhóm Coliforms đặc trưng là Escherichia coli ( E. coli ). Nhóm Staphylococcus đặc trưng là Staphylococcus aureus ( S. aureus ). Nhóm Streptococcus đặc trưng là Streptococcus faecalis ( S. faecalis ). Nhóm Clostridium đặc trưng là Clostridium perfringens ( C. perfringents ). Nhóm Coliforms Coliforms từ lâu đã được xem như một vi sinh vật chỉ thị thích hợp về chất lượng nước, chúng được dùng thoáng đãng vì dễ phát hiện và định lượng. Chúng được dùng để chỉ thị năng lực xuất hiện của những vi sinh vật khác trong nước. Chỉ số Coliforms cao thì sự hiện hữu của những vi sinh vật gây bệnh cũng cao. Nguồn gốc. Vào cuối những năm 1800 khi Von Fritsch được miêu tả Klebsiella pneumoniae và Klebsiella rhinoscleromatis như là vi sinh vật đặc trưng được tìm thấy trong phân con người ( Geldreich 1978 ). Năm 1885 Percy và Grace Frankland tiên phong tiếp tục xét nghiệm vi khuẩn trong nước ở London. Robert Kouch sử dụng chất keo rắn nấu bằng phương tiện đi lại truyền thống cuội nguồn để đếm vi khuẩn ( Hutchinson và Ridgway 1977 ). Đầu thập niên 1900 ( Cabelli, 1977 ), ông cho rằng sự vắng mặt của coliforms như thể một tín hiệu cho thấy không Open bệnh do vi khuẩn gây nên, và sau khi sản xuất khí đốt với việc trình làng ống Durham ( Durham năm 1893 ) thì khái niệm về nhóm vi khuẩn Coliforms và những vi khuẩn khác dạng coli được sử dụng ở nước Anh năm 1901. Năm 1908 Bergey và deehan xác lập có 256 loài khác nhau của nhóm vi khuẩn Coliforms. Năm 1909 MacConkey công nhận 128 loài khác nhau của nhóm vi khuẩn Coliforms. Đến đầu thập niên 1920, sự độc lạ của những dạng vi khuẩn coli được đem ra sản xuất indole, hóa lỏng gelatin, lên men đường sucrose và Voges – Proskauer nhằm mục đích xác lập sự ô nhiễm faecal ( Hendricks 1978 ). Năm 1938 Parr có những ý tưởng lên tới đỉnh điểm trong thử nghiệm IMVIC ( Indole, Methyl đỏ, voges – Proskauer và muối của acid Citric ). Việc thử nghiệm cho thấy sự độc lạ của những dạng vi khuẩn Coliforms phân, những dạng vi khuẩn trong đất và trung gian, và nó được sử dụng cho đến ngày ngày hôm nay. Đặc điểm. Coliforms là những trực khuẩn Gram âm, hình gậy, không sinh bào tử, có phản ứng oxidase âm tính và biểu lộ hoạt tính của β – galactosidase có năng lực sinh hơi, acid và aldehyde do lên men đường lactose trong vòng 24 – 48 giờ ở nhiệt độ 36 ± 2 oC. Coliforms có năng lực tăng trưởng trên môi trường tự nhiên muối mật hoặc những chất hoạt tính bề mặt khác có đặc thù ức chế tựa như. Nhóm Coliforms gồm 4 chi : Escherichia, Klebsiella, Enterobacter, Citrobacter. Tuy nhiên, theo những giải pháp phân loại mới thì nhóm này không như nhau. Nhóm này gồm có những vi khuẩn có năng lực lên men lactose như Escherichia cloacae, Citrobacter freundii hoàn toàn có thể tìm thấy trong phân và ngoài môi trường tự nhiên nước giàu chất dinh dưỡng, đất và xác thực vật cũng như trong nước uống có nồng độ dinh dưỡng tương đối cao. Ngoài ra, nhóm này còn gồm có những loài như Seratia fonticola, Rabnella aqualiris, Buttiaxella agrestis hiếm thấy trong phân và hoàn toàn có thể thấy trong nước uống có chất lượng tốt. Coliforms chịu nhiệt : Vi khuẩn coliforms chịu nhiệt là những coliforms có năng lực lên men đường lactose ở 44 – 45 oC ; nhóm này gồm có Escherichia, Kiebsiella, Enterobacter, Citrobacter. Khác với E.Coli, coliforms chịu nhiệt hoàn toàn có thể nguồn gốc từ nguồn nước giàu chất hữu cơ như nước thải công nghiệp từ xác thực vật thối rữa hoặc đất. Coliforms chịu nhiệt không tái phát triển trong mạng lưới hệ thống phân phối nước ngoại trừ khi nước chứa đủ chất dinh dưỡng do nhiễm bẩn, nhiệt độ của nước cao hơn 13 oC và nước không có chlor thừa. Trong đại đa số những trường hợp, đậm độ của Coliforms chịu nhiệt có tương quan trực tiếp đến đậm độ của E.Coli. Vì vậy, việc sử dụng dạng vi khuẩn này để nhìn nhận chất lượng nước được gật đầu. Coliforms phân : là nhóm Coliforms chịu nhiệt có năng lực lên men sinh indol khi ủ ở nhiệt độ 44 oC khoảng chừng 24 giờ trong canh trypton. Nguồn gốc của Coliforms từ ruột của người và những động vật hoang dã máu nóng. Do đó, nếu xuất hiện nhóm Coliforms phân nghĩa là thiên nhiên và môi trường bị nhiễm vi sinh vật đường ruột. E. coli được Bucher tìm ra năm 1885 và được Escherich điều tra và nghiên cứu không thiếu năm 1886. E. coli thông thường sống trong ruột già. Trong tiếng Latin ruột già là colum. Vì tôn trọng nhà khoa học nên người ta lấy tên ông ghép vào chữ ruột già theo ngữ pháp sở hữu cách tiếng Latin, nên loại vi khuẩn này được gọi là Escherichia coli. Như vậy sự xuất hiện của vi khuẩn này ở môi trường tự nhiên bên ngoài chứng tỏ thiên nhiên và môi trường đó có năng lực ô nhiễm từ phân. E. coli là thành viên của họ Enterobacteriace được đặc trưng bởi đặc thù có enzyme β – galactosidase và β – glucoronidase. Nó tăng trưởng ở nhiệt độ 44 – 45 oC trên thiên nhiên và môi trường tổng hợp, lên men lactose và mannitol có sinh hơi và sinh acid, sinh indol từ tryptophan. Tuy nhiên 1 số ít chủng cũng hoàn toàn có thể tăng trưởng ở nhiệt độ 37 oC chứ không tăng trưởng ở 44 – 45 oC và 1 số ít thì không sinh hơi. E. coli không sinh oxidase hoặc phân hủy urea. E. coli xuất hiện rất nhiều trong phân người và động vật hoang dã máu nóng. Mật độ của chúng hoàn toàn có thể lên đến 109 vi khuẩn / gam. Vi khuẩn này được dùng để nhìn nhận mức độ ô nhiễm phân, chính do nó thường tạo khuẩn lạc trên thành ruột và nó không gây nguy khốn cho sức khỏe thể chất. Nhóm staphylococcus Staphylococcus là những cầu khuẩn Gram dương không tạo bào tử, có đường kính khoảng chừng 1 µm, không di động và sắp xếp theo mọi hướng, thường tạo thành cụm trông giống như chùm nho. Là mộ trong những vi khuẩn nổi tiếng nhất do tỷ suất gây bệnh rất cao, có năng lực gây nhiều bệnh nặng cũng như đề kháng kháng sinh rất mạnh. Các nhà vi khuẩn học lùng danh như Robert Kouch và Louis Pasteur đều chăm sóc nghiên cứu và điều tra dạng vi khuẩn này. Trên phương diện gây bệnh, tụ cầu khuẩn được chia thành 2 nhóm chính là tụ cầu khuẩn có men coagulase và tụ cầu khuẩn không có men coagulase. Tụ cầu khuẩn có men cosgulase : nuôi trên thiên nhiên và môi trường nuôi cấy có máu, khuẩn lạc màu vàng nên hay còn gọi là tụ cầu vàng. Tụ cầu khuẩn không có men coagulase : nuôi cấy trên thiên nhiên và môi trường nuôi cấy có máu, khuẩn lạc màu trắng ngà nên hay còn gọi là tụ cầu trắng. Staphylococcus được phân lập đa phần từ da và chất nhầy của người và động vật hoang dã máu nóng. Do đó, hoàn toàn có thể sử dụng nhóm vi khuẩn này để kiểm tra xem môi trường tự nhiên hay những mẫu thực phẩm có nhiễm vi sinh vật gây bệnh hay không, có bảo vệ vệ bảo đảm an toàn thực phẩm hay không. Staphylococcus aureus là tụ cầu khuẩn được dùng làm vi sinh vật chỉ thị rất phổ cập. Staphylococcus aureus là vi khuẩn Gram dương, hiếu khí hoặc kỵ khí tùy ý, khi nuôi cấy trên thiên nhiên và môi trường thạch máu, một số ít dòng vi khuẩn làm tan máu, tạo sắc tố vàng sau 1 – 2 ngày nuôi cấy ở nhiệt độ phòng. Nhóm Streptococcus Streptococcus là những vi khuẩn Gram dương, dạng hình cầu hay ovan, xếp thành chuỗi từ 4 – 6 tế bào hoặc thành 2 chuỗi tế bào. Trên môi trường tự nhiên thạch máu vi khuẩn tăng trưởng thành những khuẩn lạc nhỏ, đặc biệt quan trọng là gây dung huyết. Vi khuẩn lên men đường mannitol, sorbitol, melibinose, Vi khuẩn Streptococcus phân bổ thoáng đãng trong tự nhiên và trong đường tiêu hóa, hô hấp phần dưới ống tiêu hóa và trên da của khung hình người, động vật hoang dã. Streptococcus phân là những liên cầu khuẩn kỵ khí tùy ý có nguồn gốc từ phân. Chúng có hình ovan, Gram dương, thường tụ thành đôi hay chuỗi ngắn, không sinh bào tử, 1 số ít dòng có năng lực sinh vỏ nhầy. Khuẩn lạc có màu hồng đến đỏ đậm do sự khử triphenyl tetrazolium chloride. Chúng âm tính với phản ứng catalase, hoàn toàn có thể tăng trưởng trên thiên nhiên và môi trường chứa 6,4 % muối NaCl, pH = 9,6 và nhiệt độ 45 oC. Chỉ số Coliforms phân và Streptococcus phân dùng để chỉ thị nguồn gốc ô nhiễm từ con người hay động vật hoang dã. Khi tỷ số này dưới 0,7 nghĩa là ô nhiễm từ động vật hoang dã, còn lớn hơn 4 là từ con người. Nhóm Clostridium Clotridium là vi khuẩn Gram dương, hình que, kỵ khí, sinh bào tử, hầu hết có năng lực di động. Chúng là vi khuẩn hoại sinh có năng lực phân hủy protein và saccharide để sinh nguồn năng lượng và tổng hợp tế bào. Một số loài chuyển hóa không trọn vẹn protein gây ra mùi không dễ chịu. Clotridium hiện hữu trong đất, một số ít loài gây bệnh cho người, động vật hoang dã và một số ít loài gây hư hỏng thực phẩm. Clotridium được xác lập tỷ lệ bằng cách nuôi trên thiên nhiên và môi trường ferri amonium citrate và disodium sulfite ủ ở 37 oC trong 1 – 2 ngày. Khuẩn lạc của Clotridium màu đen do phản ứng giữa ion sulfite ( S2 – ) và ion sắt ( Fe2 + ) có trong môi trường tự nhiên. Clotridium perfringens là loài kỵ khí không bắt buộc, hiếm khi tạo ào tử trong thiên nhiên và môi trường tự tạo, nhưng hoàn toàn có thể được quan sát ở thiên nhiên và môi trường Ellner, thiên nhiên và môi trường bổ trợ muối mật và bicarbonate hay quinoline. Độc tố của chúng có thẻ gây hoại tử và ngộ độc thực phẩm. Mặc dù sinh bào tử khiến chúng đề kháng mạnh với môi trường tự nhiên nhưng vi khuẩn này là đối tượng người tiêu dùng đáng an toàn và đáng tin cậy cho việc xác lập những vùng biển nhiễm phân. Một số chiêu thức xác lập vi sinh vật chỉ thị Phương pháp đếm khuẩn lạc Môi trường và hóa chất Môi trường sử dụng là Plate Count Agar ( PCA ) có pH 7,0 ± 0,2. Môi trường được pha chế, phân phối vào trong những bình thủy tinh hay trong những ống nghiệm và hấp khử trùng ở 121 oC trong 15 phút. Các bình hoặc ống nghiệm chứa môi trường tự nhiên chưa được sử dụng được dữ gìn và bảo vệ trong tủ lạnh 2 – 8 oC. Trước khi sử dụng môi trường tự nhiên phải được đun chảy và làm nguội 45 oC trong bể điều nhiệt. Ngoài môi trường tự nhiên trên, còn hoàn toàn có thể sử dụng cả thiên nhiên và môi trường khác như Tryptose Glucose Agar, Nutrient Agar. Dung dịch nước muối pepton SPW ( Saline Pepton Water ) dùng pha loãng chứa 8,5 g NaCl và 1 g peptone trong 100 ml nước. Dung dịch này được chứa trong những bình chứa 0,5 – 1,0 lít, hấp khử trùng và được pân phối thành những thể tích đúng mực 9 ml vào trong những ống nghiệm vô trùng. Quy trình nghiên cứu và phân tích Chuẩn bị mẫu trước khi nghiên cứu và phân tích : Trước khi triển khai nghiên cứu và phân tích, triển khai việc giống hệt mẫu như sau : so với mẫu dạng rắn dùng những dụng cụ như kéo, kẹp đã được khử trùng cân đúng chuẩn 10 g mẫu vào trong bao PE. Tất cả những thao tác tiếp theo cần phải triển khai trong điều kiện kèm theo vô trùng. Thêm vào lượng mẫu này 90 ml dung dịch pha loãng SPW. Thực hiện việc giống hệt mẫu bằng máy dập mẫu. Thời gian dập mẫu phụ thuộc vào vào đặc thù cơ lý của mẫu, nhưng không quá 2,5 phút. Trong trường hợp không có máy dập mẫu thực thi thao tác như nhau như sau : xát nhuyễn mẫu trong điều kiện kèm theo vô trùng. Cân đúng mực trong điều kiện kèm theo vô trùng nước SPW đã được hấp khử trùng. Lắc đều trong một thời hạn nhất định. Đối với mẫu dạng lỏng, hút 10 ml cho vào bình tam giác chứa 90 ml nước SPW đã được hấp khử trùng, lắc đều. Sau khi được làm như nhau bằng một trong những chiêu thức trên, dung dịch thu được có nồng độ pha loãng bằng 10 lần so với khởi đầu. Dịch mẫu giống hệt được liên tục pha loãng theo dãy thập phân bằng cách dùng pipet vô trùng ( hoặc pipetman với đầu tip vô trùng ) chuyển 1 ml dịch vào ống nghiệm chứa 9 ml dung dịch pha loãng. Trộn mẫu trong ống nghiệm cho giống hệt bằng máy rung ( vortex ) hay dùng pipet hút hòn đảo dịch mẫu lên xuống 5 – 10 lần. Dung dịch mẫu này có độ pha loãng là 10-2. Sau đó sử dụng pipetman có đầu tip vô trùng chuyển 1 ml dịch mẫu này vào ống nghiệm thứ 2 chứa dung dịch pha loãng và thao tác tương tự như để có dịch mẫu với độ pha loãng 10-3. Tiếp tục thực thi tương tự như để có những độ pha loãng thiết yếu. Lưu ý nếu dùng pipet hoặc đầu tip pipetman rủi ro tiềm ẩn bị nhiễm trong quy trình thao tác ( chạm tay, chạm mặt ngoài ống nghiệm, mặt ngoài bình chứa, .. ), cần phải thay pipet hoặc đầu tip vô trùng khác. Cấy mẫu : Chọn 2 hay 3 độ pha loãng liên tục dự kiến chứa 25 – 250 tế bào vi sinh vật trong 1 ml để cấy lên đĩa petri. Dùng pipet vô trùng hoặc pipetman với đầu tip vô trùng chuyển 1 ml dịch mẫu pha loãng đã chọn vào giữa đĩa petri vô trùng. Tương ứng với mỗi nồng độ pha loãng cấy tối thiểu 2 – 3 đĩa. Sau khi cấy đổ vào mỗi đĩa 10 – 15 ml môi trường tự nhiên PCA đã được đun chảy và không thay đổi ở 45 oC. Trộn đều dịch mẫu với môi trường tự nhiên bằng cách xoay tròn đĩa petri xuôi và ngược chiều kim đồng hồ đeo tay, mỗi chiều 3 – 5 lần ngay sau khi đổ môi trường tự nhiên. Đặt những đĩa trên mặt phẳng ngang cho thạch đông đặc. Lật ngược và ủ những đĩa trong tủ ấm ở nhiệt độ 30 ± 10 oC trong vòng 72 giờ. Nhiệt độ và thời hạn ủ hoàn toàn có thể đổi khác theo lao lý của tiêu chuẩn. Cách tính hiệu quả : A ( CFU / g hay CFU / ml ) = Nn1Vf1 + + niVfi x R Trong đó : A là tổng số tế bào ( đơn vị chức năng hình thành khuẩn lạc ) trong 1 g hoặc 1 ml mẫu. N là tổng số khuẩn lạc đếm được trên những đĩa đã chọn. n1 là số lượng đĩa cấy được chọn tại độ pha loãng thứ i. V là thể tích dịch mẫu ( ml ) cấy vào trong mỗi đĩa. fi là độ pha loãng tương ứng. R là tỷ suất chứng minh và khẳng định. Phương pháp MPN ( Most Probale Number ) Phương pháp MPN hay giải pháp có số xác xuất lớn nhất, số tối khả dùng để nhìn nhận số lượng vi sinh vật có xác xuất lớn nhất trong một thể tích dung dịch mẫu. Phương pháp này định lượng dựa trên hiệu quả của một loạt thí nghiệm lặp lại ở những nồng độ pha loãng khác nhau. Thông thường, việc định lượng này được lặp lại 3 lần ở 3 độ pha loãng khác nhau liên tục. Quy trình triển khai theo chiêu thức này như sau : cho những ống nghiệm có chứa thiên nhiên và môi trường tinh lọc thích hợp với mộ thể tích đúng mực dung dịch mẫu ở 3 độ pha loãng liên tục ( thường là 10-1, 10-2, 10-3 ) ủ ở nhiệt độ và thời hạn thích hợp. Ghi nhận số ống dương thế ở mỗi độ pha loãng. Đối với bước khẳng định chắc chắn, chuyển một phần những ống dương thế ở bước xác lập sang ống nghiệm chứa môi trường tự nhiên chứng minh và khẳng định rồi ủ ở thời hạn và nhiệt độ thích hợp. Sau thời hạn ủ, đếm số ống dương thế. Sử dụng số liệu và tra bảng Mac Crady để suy ra số vi sinh vật được trình diễn ở dạng bảng MPN trên 100 ml hay MPN trên 1 g mẫu. Cần chú ý quan tâm rằng bảng MPN phân phối ở dạng số MPN trên 100 ml dung dịch được dùng để nghiên cứu và phân tích ở những liều lượng 10 ml, 1 ml và 0,1 ml. Việc sử dụng những liều lượng khác nhau dễ gây tác động ảnh hưởng đến nồng độ thiên nhiên và môi trường và do đó tác động ảnh hưởng đến hiệu quả. Do đó, trong nghiên cứu và phân tích thường dùng độ pha loãng bậc 10. Số liệu của bảng MPN trên 100 ml ở những dung tích mẫu 10 ml, 1 ml và 0,1 ml tương tự với MPN / ml mẫu chưa pha loãng khi 1 ml mẫu ở độ pha loãng 10-1, 10-2, 10-3. Trường hợp mẫu có mậc độ vi sinh vật cao khi pha loãng cần tính thêm thông số pha loãng. Phương pháp MPN được sử dụng thông dụng trong định lượng Coliforms tổng số, Coliforms phân, E. coli và những vi sinh vật khác. Phương pháp ELISA Là chiêu thức hấp thu miễn dịch dùng enzyme. Đây là chiêu thức hiệu suất cao và nhanh gọn trong phát hiện vi sinh vật. Nguyên tắc của giải pháp là sử dụng kháng thể đơn dòng phủ bên ngoài đĩa giếng. Nếu có sự hiện hữu của kháng nguyên tiềm năng thì kháng nguyên sẽ bị giữ lại trên mặt phẳng giếng. Các kháng nguyên này sau đó được phát hiện bằng kháng thể thứ cấp có gắn với enzyme như horseradish perosidase hay alkaline phosphatase. Khi bổ trợ cơ chất đặc hiệu của enyme vào thì enzyme sẽ xúc tác tạo ra mẫu sản phẩm có màu hoặc phát sáng. Dựa vào sự biến hóa màu hay ánh sáng mà khẳng định chắc chắn sự xuất hiện và định lượng kháng nguyên cần tìm. Hiện nay chiêu thức ELISA đã được thương mại hóa dưới dạng những bộ kít. Chỉ sau thời hạn vài giờ là hoàn toàn có thể xác lập được vi sinh vật trong mẫu. Tuy nhiên, giải pháp này cần tăng sinh trước khi đưa vào phản ứng. Kháng nguyên sử dụng trong giải pháp ELISA rất dạng hoàn toàn có thể là môt phần của vi sinh vật hoặc độc tố do chúng tạo ra tùy thuộc vào phong cách thiết kế. Hiện nay chiêu thức ELISA đã có những bộ kít thương mại trong định danh E.coli, Staphylococcus, Salmonella. Phương pháp lai phân tử Phương pháp lai phân tử được thực thi dựa trên đặc thù của DNA : tách mạch khi ở nhiệt độ cao và lắp ráp khi nhiệt độ giảm xuống. Tính chất này cũng được tìm thấy ở RNA. Phương pháp này triển khai bằng cách phá vỡ tế bào vi sinh vật để thu nhận rRNA. Sau đó, đưa đầu dò là những đoạn DNA đặc trưng có gắng mẫu dò và dung dịch, khi nhiệt độ được đưa xuống dưới nhiệt độ tách mạch của DNA, thì đoạn DNA đặc trưng sẽ gắn vào vị trí nhất định trên rRNA. Thực hiện phản ứng với mẫu dò sẽ xác lập được sự xuất hiện là nồng độ rRNA có trong dung dịch phản ứng. Hiện nay đã có những bộ kít phát hiện nhanh vi sinh vật bằng chiêu thức lai phân tử. Các đối tượng người dùng phát hiện được là E.coli, staphylococcus, salmonella. Phương pháp PCR phối hợp điện di Phương pháp PCR là chiêu thức invitro để tổng hợp DNA dựa trên khuôn là môt trình tự đích DNA bắt đầu thành hàng triệu bản sao nhờ enzyme polymerase và một cặp mồi. Kỹ thuật nay được Karl Mullis và tập sự phát hiện năm 1985. Phản ứng PCR được thực thi dựa vào nhiệt độ tách mạch DNA. Sau đó hạ thấp nhiệt độ xuống thì mồi là những đoạn olygonucleotide sẽ gắn vào những vị trí đặc hiệu để bảo vệ cho những phản ứng tổng hợp diễn ra do enzyme polymerase. Quá trình lặp lại cho đến khi đạt đến số lượng DNA thiết yếu. Phản ứng PCA gồm nhiều chu kỳ luân hồi nối nhau. Mỗi chu kỳ luân hồi gồm 3 bước : Bước biến tính : dung dịch phản ứng gồm những thành phần thiết yếu cho sự sao chép, phân tử DNA được biến tính ở nhiệt độ cao hơn Tm của phân tử. Mạch đôi DNA tách nhau ra. Thời gian lê dài tù 30 – 60 s. Bước lai : nhiệt độ hạ thấp hơn Tm được cho phép bắt cặp xảy ra giữa mồi và mạch khuôn. Nhiệt độ này xê dịch từ 40 – 70 oC, thời hạn lê dài từ 30 – 60 s. Bước tổng hợp : nhiệt độ được tăng lên 72 oC giúp cho enzyme DNA-polymerase hoạt động giải trí tốt nhất. Thời gian của bước này tùy thuộc vào trình tự của DNA cần khuếch đại, thường từu 30 giây đến 1 phút. Sau khi triển khai phản ứng PCR xong, DNA được cho chạy điện di trong gel aragose. Nguyên tắc của chiêu thức này là những phân tử điện di sẽ vận động và di chuyển về cực trái dấu trong dung dịch đệm. DNA tích điện âm sẽ chuyển dời về cực dương. Sau một thời hạn nhất định, nó sẽ dừng ở một vị trí trên bản gel. Nếu nhuộm bản gel này với tuốc nhuộm như Ethydium bromide thì hoàn toàn có thể quan sát được vị trí của DNA bằng ta UV. Phương pháp này cho tác dụng nhanh do không cần thời hạn tăng sinh, thuận tiện so với việc phát hiện những vi sinh vật kó nuôi cấy, hóa chất tồn trữ được lâu và ít tốn kém về mặt nhân sự. Nó được sử dụng trong phát hiện, S. Aurius và nhiều loài vi sinh vật khác. KẾT LUẬN Vi sinh vật chỉ thị đóng vai trò quan trọng trong việc xác lập mức độ ô nhiễm thiên nhiên và môi trường, thực phẩm. Có 4 nhóm vi sinh vật chỉ thị là : Coliforms, Staphylococcus, Streptococcus, Clostridium. Một số chiêu thức xác lập vi sinh vật chỉ thị là : phươ

Xem thêm  Sắp Xếp, Quản Lý Công Việc Như Thế Nào Để Hiệu Quả - https://mbfamily.vn

Xem thêm bài viết thuộc chuyên mục: Tin tổng hợp

Related Articles

Trả lời

Email của bạn sẽ không được hiển thị công khai.

Back to top button